小鼠流感模型構(gòu)建

一、模型建立核心要素

（一）病毒毒株與適應(yīng)株

1. 常用毒株：

• H1N1 PR8（A/Puerto Rico/8/34）：標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室株，致病性穩(wěn)定，廣泛用于基礎(chǔ)研究。

• H9N2（A/swine/Jiangsu/C1/08）與 H1N1 SD731（A/swine/Shandong/731/2009）：用于模擬亞型特異性感染。

• 新甲型H1N1：需通過(guò)鼠肺傳代獲得適應(yīng)株（如SC/09），提高小鼠致死率。

2. 病毒制備：

• 擴(kuò)增：病毒接種9-11日齡SPF雞胚，收獲尿囊液分裝保存（-80℃）。

• 滴度：感染劑量通常為 1×10? TCID??/50μL 或 250 PFU（鼻內(nèi)接種）.

（二）感染途徑與方法

關(guān)鍵參數(shù)：

• 麻醉推薦異氟醚（安全可控）或干冰（快速）。

• 氣霧感染需控制霧化顆粒直徑（1-5μm）以深入肺泡。

（三）動(dòng)物品系選擇

注：

• 雌性BALB/c小鼠更常用（體重15-20g，SPF級(jí)）。

• DBA/2J品系可增強(qiáng)發(fā)病癥狀，但需注意高死亡率風(fēng)險(xiǎn)。

二、疾病進(jìn)程與評(píng)估指標(biāo)

（一）臨床監(jiān)測(cè)

1. 生存指標(biāo)：

• 體重下降：感染后3天開(kāi)始下降，>20%需人道終點(diǎn)處理。

• 存活率：重度模型（如PR8）感染后7天死亡率可達(dá)80%。

2. 行為評(píng)分：

• 活動(dòng)減少、扎堆蜷縮、呼吸急促、毛發(fā)脫落。

3. 體溫變化：

• 非發(fā)熱模型：核心體溫下降（與人類(lèi)發(fā)熱相反）。

• 濕熱證模型：高脂飼料+熱應(yīng)激后肛溫升高（表1）：

（二）器官損傷評(píng)估

1. 肺指數(shù)（核心指標(biāo)）：

• 公式：肺指數(shù) = 肺濕重（g）/ 體重（g） × 100。

• 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：感染組肺指數(shù)顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

2. 肺病理分級(jí)：

• +：炎細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管充血；

• ++：肺泡滲出物增多，部分實(shí)變；

• +++：肺組織大面積實(shí)變。

3. 多器官指標(biāo)：

• 肝損傷：ALT/AST升高。

• 腎損傷：血肌酐（Cre）≥2倍基礎(chǔ)值。

（三）分子與免疫檢測(cè)

動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)：

• 炎癥峰值：感染后12-24h（IL-6、TNF-α）。

• 器官衰竭期：24-48h（肺實(shí)變、血氧驟降）